分光光度計是采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。我們知道如何使用分光光度計的步驟嗎?
預(yù)熱儀器:為使測定穩(wěn)定,將電源開關(guān)打開,使儀器預(yù)熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續(xù)光照。預(yù)熱儀器時和在不測定時應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開,使光路切斷。
選定波長:根據(jù)實驗要求,轉(zhuǎn)動波長調(diào)節(jié)器,使指針指示所需要的單色光波長。
固定靈敏度檔:根據(jù)有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數(shù)為0.2~0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實驗過程中不再變動。一般測量固定在“1”檔。
調(diào)節(jié)“0”點:輕輕旋動調(diào)“0”電位器,使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時,比色皿暗箱蓋是打開的,光路被切斷,光電管不受光照)。
調(diào)節(jié)T=100%:將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的格內(nèi),有色溶液放在其它格內(nèi),把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器,使透光度T=100%,即,表頭指針恰好指在T=100%處。
測定:輕輕拉動比色皿座架拉桿,使有色溶液進入光路,此時表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A,讀數(shù)后,打開比色皿暗箱蓋。
關(guān)機:實驗完畢,切斷電源,將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。